液相
色谱仪（HPLC/UHPLC）是一种用于分离、鉴定和定量复杂混合物中各组分的
分析仪器，广泛应用于化学、生物、医药、食品、环境等领域。以下是其主要应用和操作步骤的详细说明：
一、液相色谱仪主要测什么？ 应用领域
制药行业：药物成分分析、杂质检测、稳定性研究。
食品安全：添加剂、农药残留、毒素（如黄曲霉毒素）检测。
环境监测：水体/土壤中的污染物（如多环芳烃、有机氯农药）。
生命科学：蛋白质、核酸、代谢物等生物分子分离。
化工行业：聚合物分子量分布、合成中间体分析。
检测物质类型
极性/非极性化合物：通过调整流动相和固定相实现分离。
热不稳定物质：适合无法用气相色谱分析的高沸点或易分解物质。
大分子物质：如蛋白质、多糖（需特殊色谱柱，如凝胶色谱）。
常见检测器及用途
紫外-可见检测器（UV-Vis）：测定具有紫外吸收的化合物（如芳香族）。
荧光检测器：高灵敏度检测荧光物质（如维生素、某些药物）。
示差折光检测器（RID）：通用型检测器，适用于无紫外吸收的物质（如糖类）。
质谱检测器（LC-MS）：提供分子量和结构信息，用于复杂样品鉴定。
二、液相色谱仪操作步骤 1. 前期准备
样品处理：过滤（0.22 μm滤膜）去除颗粒物，避免堵塞色谱柱。
流动相配制：
使用高纯度溶剂（如HPLC级甲醇、乙腈），超声脱气或真空抽滤去除气泡。
缓冲盐需现配现用（防止微生物滋生或沉淀）。
仪器检查：确认管路无泄漏、色谱柱与检测器兼容（如pH范围）。
2. 开机与平衡系统
开启仪器
电源（泵、检测器、自动进样器等），启动工作站软件。
冲洗系统：用初始流动相（如5%甲醇）低流速（0.5 mL/min）冲洗10-15分钟，逐步升高至分析流速。
色谱柱平衡：待基线稳定（UV检测器信号波动＜±0.5 mAU），通常需30分钟以上。
3. 方法设置
流速：常规分析柱常设1.0 mL/min（UHPLC可更高）。
柱温：通常25-40℃，对保留时间敏感物质需控温。
检测波长：根据目标物紫外吸收峰设定（如254 nm通用波长）。
梯度程序（如需）：
示例
0-5 min: 10% B → 50% B
5-10 min: 50% B → 90% B
10-12 min: 90% B（清洗）
12-15 min: 10% B（再平衡）
（A相：水/缓冲盐；B相：有机溶剂）
4. 进样与分析
手动进样：
用注射器吸取样品（避免气泡），切换进样阀至“Load”位置注入。
迅速切换至“Inject”开始分析。
自动进样器：在软件中设置样品瓶位置、进样体积（通常5-20 μL）。
5. 数据采集与处理
实时监测色谱图，确保峰形对称（拖尾因子1.0-1.2）。
使用工作站软件积分峰面积，外标法或内标法计算浓度。
6. 关机与维护
清洗系统：
先用高比例水相（如90%水）冲洗缓冲盐，再过渡到有机相保存色谱柱（如60%甲醇）。
反相柱长期保存需用100%有机相（如乙腈）。
关机顺序：先停检测器，再关泵，关闭工作站。
7. 注意事项
色谱柱保护：使用保护柱（Guard Column）延长分析柱寿命。
压力异常：若压力骤升，可能因堵塞（检查滤头、在线过滤器）。
基线噪声：可能由流动相污染或检测器灯能量不足引起。
三、常见问题示例 峰分叉：可能因色谱柱塌陷或样品溶剂与流动相不兼容。
保留时间漂移：检查柱温稳定性或流动相比例准确性。
